2. Рекомендация Коллегии Евразийской экономической комиссии от 15.09.2020 N 15 "О руководствах по оценке качества и исследованию биоэквивалентности отдельных групп лекарственных препаратов" (вместе с "Руководством по оценке качества и исследованию биоэквивалентности блок-сополимерных мицеллярных лекарственных препаратов", "Руководством по оценке качества и исследованию биоэквивалентности лекарственных препаратов для парентерального введения, покрытых оболочкой из наночастиц, и лекарственных препаратов на основе коллоидного железа для внутривенного введения")

Аналитические методы

38. Для сравнения воспроизведенного наноколлоидного препарата железа с референтным препаратом требуются разработка и валидация аналитических методов количественного определения аналитов в крови (плазме) и в тканях. Следует подробно изучить влияние всех процедур обработки образцов в процессе разработки аналитических методов количественного определения аналитов в крови (плазме) и в тканях с применением методологии для подтверждения пригодности и интерпретируемости всех результатов биоанализа.

39. Должны быть приведены нижние пороги количественного определения и степени извлечения для плазмы, тканей и при необходимости для отдельных исследуемых тканей по форме, приведенной в таблице.

Таблица

Депо, задействованные в распределении наноколлоидных
препаратов железа для лечения дефицита железа

Исследования биораспределения наноколлоидных
препаратов железа

40. Доклинические исследования планируются с целью подтверждения сопоставимости воспроизведенного и референтного наноколлоидных препаратов железа. Исследования должны проводиться в соответствии с Правилами надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств, утвержденными Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. N 81, если не обосновано иное (например, необходимость использования специализированных тест-систем).

41. Доклинические исследования воспроизведенного и референтного наноколлоидных препаратов железа проводятся после детального установления их характеристик. Воспроизведенный наноколлоидный препарат железа должен быть изготовлен в ходе полномасштабного (промышленного) процесса и предпочтительно взят из той же серии, которая будет использована в клинических исследованиях.

42. Считается, что при парентеральном введении наночастицы железа распознаются ретикулоэндотелиальной системой (печень, селезенка, лимфатические узлы, костный мозг, легкие и т.д.) и подвергаются фагоцитозу макрофагами, но также могут перерабатываться эндотелиальными или эпителиальными клетками (например, гепатоцитами) путем эндоцитоза. Интернализация железа может проходить разными путями в зависимости от свойств поверхности наночастиц и адсорбции белков (формирование белковой короны). Следовательно, фагоцитоз, вызываемый явлениями, подобными опсонизации, будет проходить разными путями и с разной скоростью, что с большой долей вероятности приведет к существенной межвидовой вариабельности.

43. Некоторые аспекты фармакокинетики наноколлоидных препаратов железа у человека могут быть смоделированы на основании животных и клеточных моделей. При этом исследования биораспределения в подходящей животной модели имеют принципиальное значение для оценки распределения, метаболизма и выведения данных наночастиц и продуктов их распада in vivo или растворения. Особое внимание следует уделить распределению, аккумуляции и удерживанию по меньшей мере в трех депо: плазме, ретикулоэндотелиальной системе и тканях (органах) - мишенях. В ходе данных исследований должны быть получены критически важные доказательства сопоставимости распределения, метаболизма и выведения in vivo наноколлоидных препаратов железа, поскольку невозможно полностью изучить распределение препарата в организме человека исходя только из данных о крови (плазме).

44. Анализ распределения у грызунов следует начинать с исследований с подбором дозы для установления величин доз, которые могут быть измерены с необходимой правильностью (для определения чувствительности метода), или для определения стратегии выбора наиболее подходящих моментов времени отбора проб для отражения поступления и выведения железа через соответствующую ткань. Подходящие моменты времени должны быть детально проанализированы и подобраны таким образом, чтобы полностью описывать профиль "концентрация - время" для всех исследуемых тканей. Сведения о биораспределении референтного наноколлоидного препарата железа, полученные ранее, также можно использовать в процессе планирования исследования. Ранние моменты времени отбора пробы (например, ранее чем через 24 часа) также должны быть включены в исследование для подтверждения сопоставимости в отношении клиренса ретикулоэндотелиальной системой на ранних стадиях.

45. Основное исследование распределения у одного или обоих полов с 1 дозой или 2 дозами и однократным введением может быть достаточным.

46. При выборе органов и тканей-мишеней для измерения содержания аналитов следует рассматривать как минимум органы, идентифицированные по модели распределения референтного препарата и воспроизведенного наноколлоидного препарата железа, по трем депо, указанным в таблице. Для депо ретикулоэндотелиальной системы предпочтительным органом для измерения концентраций железа является селезенка. Прочие методы измерения распределения (например, технологии визуализации) также допустимы, если доказана их эффективность.

47. Поскольку покрытые оболочкой наночастицы подвергаются распаду постепенно, измерение общей концентрации железа не отразит физиологический уровень железа или степень окисления. Однако зависящее от времени высвобождение железа, хранящегося в определенном депо, отражает процесс деградации препарата и его биологическое значение. Следовательно, измерение зависящего от времени общего содержания железа в различных тканях может оказаться достаточным для установления профиля деградации наночастицы.

48. Распределение воспроизведенного наноколлоидного препарата железа по отдельным депо должно быть установлено, помимо уровня тканей или органов, также на клеточном уровне. Очевидно, что важным этапом является установление модели клеточного распределения железа (то есть установление места распределения препарата в печени: клетки Купфера или гепатоциты).

49. Для измерения концентрации железа в тканях применяется, например, масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (ИСП-МС), атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (ИСП-АЭС) или фотометрия. Помимо этого, в качестве дополнительного метода используется гистологическое определение железа в тканях. В любом случае можно применять менее чувствительный метод, поскольку увеличение концентрации железа при внутривенном введении, как правило, и так довольно существенно. Предпочтительно предоставлять данные о количестве вещества на 1 грамм ткани, а также о процентном содержании вещества в дозе (с определением массового баланса).

50. Рекомендуется разработка дополнительных и более точных методов анализа процесса распада наночастиц. Например, системы клеточных и тканевых культур могут использоваться для изучения механизма поглощения наночастиц и продуктов их деградации или растворения ретикулоэндотелиальной системой, макрофагами или гепатоцитами (клетками Купфера).

51. При подтверждении подобия наноколлоидных препаратов железа в связи с отсутствием опыта оценки результатов сравнительных доклинических исследований биораспределения и опыта применения статистических методов анализа необходимо, чтобы данные, получаемые в результате сравнительных доклинических исследований, носили комплексный характер (данные длительного наблюдения за множеством конечных показателей различных камер). Тем не менее рекомендуется стремиться к применению количественных статистических методов, разработанных для подтверждения эквивалентности. Кроме того, спонсору исследований следует четко определить и обосновать критерии сопоставимости распределения и клиренса для сравнения с референтным наноколлоидным препаратом железа до начала исследований. Клинические проявления любого из установленных различий в распределении наноколлоидного препарата железа в тканях между воспроизведенным и референтным наноколлоидными препаратами железа должны детально обсуждаться в регистрационном досье (модуль 2.4).

52. Данные, полученные в ходе исследования биораспределения, могут быть проанализированы бескамерным методом с учетом выборочного (с разрушением образца) отбора пробы для получения общих параметров Cmax (максимального количества), tmax (момента максимальной концентрации или количества) и AUC (площади под кривой зависимости концентрации от времени). Моделирование с применением физиологически обоснованной фармакокинетической модели или эмпирических моделей также может использоваться для дополнения бескамерного анализа данных концентрации (или количества) вещества в жидкости (ткани). Общие параметры (Cmax, tmax, AUC) должны быть получены на основании обоих типов анализа: с использованием модели и бескамерного метода.

Исследования токсичности обладают недостаточной чувствительностью для установления различий между воспроизведенным и референтным наноколлоидными препаратами железа. По этой причине они не подходят для этой цели и ведут к нерациональному использованию лабораторных животных. В случае наличия специфических опасений насчет безопасности наноколлоидных препаратов железа для их проработки может быть достаточно указания соответствующих конечных точек безопасности, включенных в дизайн исследования биораспределения.