Приложение 4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД | Среды для определения общей бактериальной обсемененности
Приложение 4 
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Среды для определения общей бактериальной обсемененности
1. Мясо-пептонный бульон. Освобожденное от костей, жира и сухожилий говяжье или конское мясо пропускают через мясорубку и заливают холодной водопроводной водой из расчета 1 л воды на 500 г мяса. Смесь водопроводной воды с фаршем медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 часов. Небольшое количество (до 5 л) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек мяса. Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности мясной воды фильтруют сначала небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр, если жидкость прозрачная, вода готова. Затем жидкость сцеживают через полотно, сюда же отжимают сок из вареного мяса, доливают кипяченой водой до первоначального объема, разливают в чистую посуду (колбы, бутылки) и стерилизуют 20 мин. в автоклаве при температуре 120 град. C. Из полученной мясной воды готовят мясо-пептонный бульон. К 1 л мясной воды добавляют 10 г пептона, 5 г NaCl, устанавливают реакцию до pH 7,0 - 7,2, кипятят, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в чистую посуду и стерилизуют 20 мин. в автоклаве при температуре 120 град. C. В случае выпадения осадка в мясо-пептонном бульоне его вторично фильтруют с последующей стерилизацией.
2. Мясо-пептонный агар. К мясо-пептонному бульону прибавляют 1,5% мелко нарезанного агара. Ставят на слабый огонь для растворения. Устанавливают реакцию до pH 7,0 - 7,2, кипятят 12 - 15 мин., фильтруют через вату, добавляют 1% глюкозы, разливают в колбы или пробирки, стерилизуют при температуре 120 град. C в течение 20 мин.
3. Сухой питательный агар выпускается Дагестанским научно-исследовательским институтом питательных сред.
Среды и реактивы для выявления бактерий кишечной группы
1. Концентрированная среда Эйкмана. В 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлористого натрия, смесь нагревают до кипения, фильтруют, прибавляют 100 г глюкозы, устанавливают pH 7,4 - 7,6, разливают по 10 куб. см в пробирки. Среду стерилизуют текучим паром 30 мин., считая с момента, когда термометр покажет температуру 100 град C. Стерилизация текучим паром должна производиться 3 дня подряд. В промежутках между стерилизациями среда должна находиться в помещениях с температурой не ниже 16 град. C.
2. Среда Эндо. 100 куб. см мясо-пептоного агара (pH 7,4) расправляют на водяной бане, охлаждают до 70 град. C и прибавляют 1 г химически чистой лактозы, предварительно растворенной в небольшом количестве стерильной прокипяченной дистиллированной воды.
В отдельных пробирках приготовляют:
а) 2 - 3 куб. см спиртного насыщенного раствора основного фуксина;
б) 10 куб. см 10%-ного водного раствора сернокислого натрия или 10 куб. см 20%-ного водного раствора кристаллического сернокислого натрия.
В стерильную пробирку отмеряют 1 куб. см раствора фуксина и прибавляют раствор сернистокислого натрия до обесцвечивания фуксина. Приготовленную смесь вливают в растопленный агар, хорошо перемешивают (избегая образования пены) и разливают по чашкам.
Горячий агар имеет бледно-розовый цвет, при застывании становится бесцветным.
3. Сухая среда Эндо выпускается Дагестанским научно-исследовательским институтом питательных сред.
4. Среда Гисса. К 100 куб. см дистиллированной воды добавляют 1 г пептона, 0,5 химически чистого хлористого натрия, 0,5 углевода и 1 куб. см индикатора Анредэ. Устанавливают pH 7,0. Среду разливают в пробирки по 5 куб. см с поплавками и стерилизуют при 110 град. C 20 мин. Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.
Можно использовать сухие среды Гисса: сухой препарат с индикатором ВР, глюкозой.
5. Индикатор Андредэ. К 100 куб. см дистиллированной воды добавляют 0,5 г кислого фуксина и 16,4 куб. см 1%-ного раствора едкого натрия. Стерилизуют при 110 - 112 град. C в течение 5 мин. и хранят в темноте.
6. Реактивы для окраски по Граму.
а) 1%-ный водный раствор метилового фиолетового;
б) раствор йода по Бурке: 100 куб. см дистиллированной воды, 2 г йодистого калия, 1 г йода;
в) 0,5%-ный водный раствор сафранина.
Среды для выявления плесеней
Агаризованное солодовое сусло. К 1000 куб. см солодового сусла (7 - 8%) прибавляют 20 г расправленного на водяной бане или в аппарате Коха агара. Смесь фильтруют через гигроскопическую вату или фильтрованную бумагу. Фильтрат разливают по стерильным колбам и стерилизуют 15 мин. при температуре 115 град. C или 3 дня по 30 мин. в аппарате Коха при температуре 100 град. C. Среду можно приготовить, используя вместо сусла солодовый экстракт.
Агаризованное солодовое сусло должно иметь pH 5,6 - 5,8.
