5.2. Мизиды
5.2. Мизиды 
5.2.1. Характеристика тест-объекта
Мизиды являются существенным компонентом пищи многих видов рыб и обладают высокими продукционными способностями. Многочисленны в прибрежной зоне морей, удобны в качестве тест-объекта. Легко культивируются в лабораторных условиях и широко используются в токсикологических исследованиях.
В настоящее время культура морских мизид в России отсутствует, поэтому исследования предлагается проводить с природными организмами мизид. Аналогично проводятся исследования с другими природными зоопланктонными ракообразными.
В прибрежной зоне дальневосточных морей многочисленна мизида удивительная (Neomysis mirabilis), которую удобно использовать в качестве тест-объекта. Она распространена в северной части Тихого океана от Сангарского пролива до Командорских островов и Аляски. Обитает на глубинах от 1 до 50 м. Легко адаптируется к лабораторным условиям и широко используется в токсикологических исследованиях, так как обладает низкой резистентностью к воздействию многих химических веществ.
5.2.2. Условия лабораторного содержания
Мизиды легко отлавливаются в прибрежной зоне и содержатся в адаптационных аквариумах в лабораторных условиях в течение 48 ч до начала эксперимента. Травмированные организмы за это время погибают, а остальные акклиматизируются к лабораторным условиям (освещению, температуре, солености воды). По возможности эксперименты проводят с мизидами на ранних стадиях развития.
Для получения молоди, самки мизид с марсупиальными сумками, содержащими эмбрионов на последних стадиях развития, помещаются в специальные емкости. Выметанная молодь (возрастом 3 - 5 суток) отбирается для экспериментов.
Адаптированных к лабораторным условиям мизид длиной 9 - 12 мм, возрастом 2 месяца и старше также отбирают для экспериментов.
Обязательно проведение оценки физиологической активности взятых для
эксперимента организмов по эталонному веществу, с записью в отчете
полученной величины ЛК .
50
5.2.3. Проведение исследований
В остром опыте в каждый стакан помещают по 5 экземпляров мизид на 0,5 дм3 раствора. Выметанную молодь для острых опытов рассаживают по 6 экземпляров в 0,2 дм3 раствора. Для анализа токсичности раствора необходимо проверить, как минимум, 5 концентраций в 3 - 5 повторностях. При этом следует стремиться к тому, чтобы по крайней мере по одной концентрации вызывали эффект менее 50% и более 50%. Параллельно ставится контрольный опыт также в 3 - 5 повторностях с организмами из той же партии. В течение 96 ч острого эксперимента мизид не кормят.
По результатам 96 часового эксперимента рассчитывают токсикологические
параметры острого опыта (ЛК , ЛК , ЛК ).
0 50 100
Длительность хронического эксперимента до 30 суток. В опыт отбираются 3 - 5 суточные экземпляры мизид, выметанных в лаборатории - по 10 экземпляров на 0,5 л раствора. Кормить мизид в первые две недели необходимо 2 раза в сутки измельченным природным планктоном, а в последующем - живыми науплиями артемий.
Смена раствора в эксперименте осуществляется 1 раз в 3 дня, учитывая плотность посадки, а также - с учетом стабильности исследуемого вещества.
В первую неделю подсчет выживших рачков проводят ежесуточно, а в последующем - каждые 1 - 2 дня. В конце эксперимента мизид измеряют.
5.2.4. Учет и анализ результатов
Тест-функцией состояния организмов служит их выживаемость, регистрируется также процент уродливых особей. Отмечается изменение внешнего вида, поведенческие реакции, вес и размер особей.
Критерием для определения гибели служит отсутствие реакции на стеклянную палочку. Вследствие того, что мертвые рачки могут разлагаться или быть съеденными в промежутках между подсчетами, следует учитывать только живых организмов (при каннибализме мизид рассаживают по одному). Погибшие мизиды удаляются при каждом наблюдении.
Если смертность в контрольной группе превышает 10%, все данные признаются недействительными и эксперимент повторяется заново.
По окончании опытов с помощью пробит-анализа проводят расчеты
параметров токсичности - Лко, ЛК , ЛК , ЛК , и ЛК .
5 50 95 100
При смертности тест-объектов в контроле, превышающей 5%, вводится поправка Аббота (п. 1.3 Приложения 4). Достоверность различий с контролем оценивается при 5% уровне значимости.
