"МР 2.2.0393-25. 2.2. Гигиена труда. Методы лабораторной специфической диагностики профессиональных аллергических заболеваний. Методические рекомендации" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 08.10.2025)

Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
А.Ю.ПОПОВА
8 октября 2025 г.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
МР 2.2.0393-25

I. Область применения

1.1. Настоящие методические рекомендации (далее - МР) описывают методические подходы к выполнению комплекса лабораторных методов диагностики профессиональных аллергических заболеваний, связанных с воздействием химических веществ в рамках проведения предварительных и периодических медицинских осмотров.

1.2. Настоящие МР предназначены для специалистов органов и организаций, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), а также могут быть использованы специалистами медицинских организаций любой формы собственности, имеющих право на проведение предварительных и периодических медицинских осмотров <1>, центров профпатологии, имеющих право на проведение экспертизы связи заболевания с профессией и профессиональной пригодности <2>, а также научно-исследовательских и образовательных организаций, реализующих образовательные программы по подготовке и повышению квалификации врачей-специалистов гигиенического профиля.

--------------------------------

<1> Пункт 4 приказа Минздрава России от 28.01.2021 N 29н "Об утверждении порядка проведения обязательных предварительных и периодических медицинских осмотров работников, предусмотренных частью четвертой статьи 213 Трудового кодекса Российской Федерации, перечня медицинских противопоказаний к осуществлению работ с вредными и (или) опасными производственными факторами, а также работам, при выполнении которых проводятся обязательные предварительные и периодические медицинские осмотры" (зарегистрирован Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62277), с изменениями, внесенными приказами Минздрава России от 01.02.2022 N 44н (зарегистрирован Минюстом России 09.02.2022, регистрационный N 67206); от 02.10.2024 N 509н (зарегистрирован Минюстом России 01.11.2024, регистрационный N 79994) (далее - приказ Минздрава России от 28.01.2021 N 29н).

<2> Пункт 44 приказа Минздрава России от 28.01.2021 N 29н.

II. Общие положения

2.1. Совершенствование лабораторных технологий диагностики различных болезней требует пересмотра методов аллергодиагностики. Внедрение автоматизированных высокопроизводительных систем, совершенствование методик выявления маркеров аллергических заболеваний, а также синтез новых химических веществ требуют кардинального пересмотра вопросов диагностики профессиональных аллергических заболеваний. Критериями выбора метода лабораторной диагностики является тип аллергической реакции, наличие тестов лабораторной диагностики для выявления причинно-значимого аллергена.

2.2. Лабораторные методы диагностики имеют ряд преимуществ перед методами in vivo, в связи с быстротой получения результата, безопасностью для пациента, отсутствием необходимости отмены лекарственного препарата, возможностью одновременного исследования наличия сенсибилизации к большому количеству аллергенов [1].

2.3. В настоящих МР представлена схема "Рекомендуемые этапы лабораторной диагностики профессиональных аллергических заболеваний" (см. приложение 2 к настоящим МР) и рекомендуемые этапы проведения лабораторных методов исследований пациентов с аллергическими заболеваниями, работающих в контакте с промышленными аллергенами, (см. приложение 3 к настоящим МР), в зависимости от наличия или отсутствия противопоказаний к обследованию in vivo.

2.4. Схемы "Рекомендуемые этапы диагностики аллергических болезней органов дыхания, ассоциированных с профессией" (см. приложение 1 к настоящим МР), "Рекомендуемые этапы диагностического поиска при диагностике профессиональных аллергических заболеваний" (см. приложение 3 к настоящим МР) рекомендуется применять при диагностике респираторных заболеваний аллергической этиологии. При диагностике других аллергических заболеваний, обследование рекомендуется проводить по той же схеме, исключая спирометрию и провокационные назальные, ингаляционные тесты.

2.5. Диагностика профессионального аллергического заболевания начинается с выявления состояния, патогномоничного профессиональному, наличия контакта с аллергеном на рабочем месте в санитарно-гигиенической характеристике условий труда. Профпатолог, проводящий экспертизу определяет план обследования в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <3>, а также приказами Минздрава России <4>.

--------------------------------

<3> СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный N 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 N 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный N 67587); от 25.05.2022 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный N 68934); от 25.06.2025 N 12 (зарегистрировано Минюстом России 25.07.2025, регистрационный N 83058); СП 2.1.3678-20 "Санитарно-эпидемиологические требования к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.12.2020 N 44 (зарегистрировано Минюстом России 30.12.2020, регистрационный N 61953), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 14.04.2022 N 12 (зарегистрировано Минюстом России 15.04.2022, регистрационный N 68213); от 20.03.2024 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 12.07.2024, регистрационный N 78805).

<4> Приказ Минздрава России от 18.05.2021 N 464н "Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований" (зарегистрирован Минюстом России 01.06.2021, регистрационный N 63737), с изменениями, внесенными приказом Минздрава России от 23.11.2021 N 1088н (зарегистрирован Минюстом России 30.11.2021, регистрационный N 66103); приказ Минздравсоцразвития России от 23.07.2010 N 541н "Об утверждении единого квалификационного справочника должностей руководителей, специалистов и служащих, раздел "Квалификационные характеристики должностей работников в сфере здравоохранения" (зарегистрирован Минюстом России 25.08.2010, регистрационный N 18247), с изменениями, внесенными приказом Минтруда России от 09.04.2018 N 214н (зарегистрировано Минюстом России 19.06.2018, регистрационный N 51386) (далее - приказ Минздравсоцразвития России от 23.07.2010 N 541н).

2.6 Выбор метода.

2.7. Выбор чувствительного метода (приложение 4 к настоящим МР).

2.7.1. Диагностика профессиональных аллергических болезней анафилактического типа иммуноглобулин E (далее - IgE) зависимые: заболевания верхних дыхательных путей, связанные с воздействием химических веществ, обладающих аллергенным действием (аллергический ринит, аллергический синусит, аллергический фарингит, аллергический ларингит, отек Квинке), профессиональная бронхиальная астма аллергическая, анафилактический шок проводится с использованием серологических методов исследования (определение специфических IgE): твердофазный неконкурентный непрямой иммуноферментный анализ (далее - ИФА) (например, Allergy Explorer, далее - Alex <5>); иммуноблоттинг (например, PROTIA Allergy-Q <6>); иммунофлюоресценция на твердой фазе (например, англ. Immuno Solid-phase Allergy Chip, далее - ImmunoCAP <7>); иммунохроматографический анализ (далее - ИХА).

--------------------------------

<5> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

<6> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

<7> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

2.7.2. Диагностика профессиональных аллергических болезней цитотоксического, иммунокомплексного типов и гиперчувствительности замедленного типа, заболевания, связанные с воздействием химических веществ, обладающих аллергенным действием - аллергический контактный дерматит, экзема, аллергическая крапивница, гиперчувствительный пневмонит (экзогенный аллергический альвеолит), лекарственная аллергия, анафилактический шок, проводится с определением специфических иммуноглобулинов G (далее - IgG) методами: ИФА, иммуноблоттинг (например, технология ProtiaAllergy-Q <8>), метод иммунофлюоресценции (например, технология ImmunoCAP <9>), твердофазный ИФА (например, технология Alex <10>) и ИХА.

--------------------------------

<8> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

<9> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

<10> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

2.7.3. Диагностика не IgE-опосредованных анафилактоидных тяжелых системных реакций проводится с использованием методов: тест активации базофилов (англ. Basophil Activation Test, далее - BAT) технология АлкорБио <11>, тест трансформации лимфоцитов.

--------------------------------

<11> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.

2.7.4. Определение мутаций HLA-B*57:01, HLA-B*15:02, HLA-*31:01, HLA-B*58:01 (человеческие лейкоцитарные антигены (далее - АГ), или система тканевой совместимости человека (далее - HLA) не является методом выявления сенсибилизации, но в отсутствии других лабораторных тестов, также может стать доказательством лекарственной сенсибилизации.

2.8. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала <12>.

--------------------------------

<12> Приказ Минтруда России N 988н, Минздрава России N 1420н от 31.12.2020 "Об утверждении перечня вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся обязательные предварительные медицинские осмотры при поступлении на работу и периодические медицинские осмотры" (зарегистрирован Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62278).

2.8.1. Забор крови проводится в утренние часы, натощак в одноразовую вакуумную пробирку:

- для проведения ИФА и ИХА с активатором свертывания (диоксид кремния, лимонная кислота, натрия цитрат, декстроза либо разделительный гель);

- для BAT с противосвертывающим агентом крови (гепарин);

- для теста трансформации лимфоцитов с противосвертывающим агентом крови (литий-гепарин).

2.8.2. Транспортировка пробирок с пробами производится в вертикальном положении для минимизации риска вытекания, а также для того, чтобы в контейнерах успели сформироваться сгустки и во избежание излишнего перемешивания крови в контейнерах (что может привести к гемолизу проб). Во время транспортировки проб в лабораторию необходимо отслеживать соблюдение температурного режима (плюс 2 - 8 °C), оптимального для проведения исследования.

Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении.

2.8.3. Пробоподготовка для проведения исследования и хранение биологического материала.

2.8.3.1. ИФА и ИХА.

Для отделения сыворотки используется центрифуга (10 минут при 3000 об/мин или 20 минут при 1500 об/мин). Пробы всегда хранят в закрытых пробирках для сохранения целостности проб. Разделительные элементы (гель) повышают стабильность пробы и сроки хранения. Следует избегать встряхивания пробирок с пробами, что увеличивает риск гемолиза. Образцы сыворотки крови не должны содержать видимых глазу включений. Образцы (аликвотированная сыворотка крови) необходимо хранить в закрытых пробирках, предотвращающих микробную контаминацию при температуре плюс 2 - 8 °C не более 5 суток.

Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении, протоколе исследования.

Допустима однократная заморозка пробирок с аликвотами сыворотки крови при температуре ниже минус 20 °C в течение 5 месяцев. Размораживание замороженных образцов сыворотки крови должно проводиться при температуре плюс 18 - 25 °C не менее 30 минут.

2.8.3.2. Тест BAT.

Пробы всегда хранят в закрытых пробирках для сохранения целостности проб. Следует избегать встряхивания пробирок с пробами, что увеличивает риск гемолиза. Образцы цельной крови не должны содержать видимых глазу включений. Образцы цельной крови в закрытых пробирках могут храниться при температуре плюс 3 - 8 °C в течение 4 часов.

Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении, протоколе исследования.

Допустима однократная заморозка пробирок с аликвотами цельной крови при температуре ниже минус 20 °C не более 2 месяцев. Размораживание замороженных проб должно проводиться при температуре плюс 18 - 25 °C не менее 30 минут.

2.8.3.3. Тест бласттрансформации лимфоцитов.

Образцы цельной крови в закрытых пробирках могут храниться при температуре плюс 2 - 8 °C в течение 1 - 2 суток. Заморозка образцов не допускается.

Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении, протоколе исследования.

2.9. Требования к оснащению лаборатории и квалификации персонала <13>.

--------------------------------

<13> Приказ Минздравсоцразвития России от 23.07.2010 N 541н; приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н "Об утверждении перечня профессиональных заболеваний" (зарегистрирован Минюстом России 18.04.2025, регистрационный N 81893) (далее - приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н); приказ Минздрава России от 29.04.2025 N 258н "Об утверждении порядка проведения экспертизы связи заболевания с профессией, учетной формы извещения об установлении диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, уточнении или отмене диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, учетной формы медицинского заключения о наличии или об отсутствии профессионального заболевания, порядка учета профессионального заболевания органом государственного санитарно-эпидемиологического контроля (надзора), проводившим расследование обстоятельств и причин возникновения у работника профессионального заболевания, формы протокола заседания комиссии по расследованию случая профессионального заболевания" (зарегистрировано Минюстом России 02.06.2025, регистрационный N 82491) (далее - приказ Минздрава России от 29.04.2025 N 258н).

2.9.1. Клинические лабораторные исследования проводятся в медицинских организациях или иных организациях, осуществляющих медицинскую деятельность на основании лицензии, предусматривающей выполнение работ (услуг) по клинической лабораторной диагностике, согласно стандарту оснащения клинико-диагностической лаборатории.

2.9.2. Клинические лабораторные исследования проводятся медицинскими работниками при наличии высшего и среднего профессионального образования, предусмотренного квалификационными требованиями к медицинским работникам, прошедшими аккредитацию или имеющими сертификат специалиста и (или) документ о дополнительном профессиональном образовании (повышение квалификации) по заявленной деятельности в сфере выполнения клинических лабораторных исследований <14>.

--------------------------------

<14> Приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н.

2.9.2.1. Преаналитический лабораторный этап проводится медицинскими работниками со средним медицинским образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, лаборант) с образованием по специальности "Лабораторная диагностика", "Лабораторное дело", "Бактериология".

Аналитический этап включает проведение клинических лабораторных исследований с использованием аналитических методик, реагентов и оборудования, и проводится медицинскими работниками со средним (см. выше) и высшим медицинским образованием по специальности "Клиническая лабораторная диагностика" (врач клинической лабораторной диагностики), а также высшим немедицинским образованием (биологи).

Постаналитический этап включает валидацию, интерпретацию результатов с оформлением лабораторного заключения (при необходимости), передачу результатов лечащему врачу или пациенту, и проводится медицинскими работниками с высшим медицинским образованием по специальности "Клиническая лабораторная диагностика" (врач клинической лабораторной диагностики), а также высшим немедицинским образованием (биологи) <15>.

--------------------------------

<15> Приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н; приказ Минздравмедпрома России от 16.08.1994 N 170 "О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ-инфекции в Российской Федерации", с изменениями, внесенными приказом Минздравмедпрома России от 18.04.1995 N 100; приказ Минздрава СССР от 12.07.1989 N 408 "О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране".

2.9.3. Требования к безопасности.

Для обеспечения безопасного труда сотрудникам иммунологических лабораторий следует руководствоваться международными стандартами надлежащей лабораторной практики (англ. Good Laboratory Practice, GLP) <16>, а также общегосударственными законами и ведомственными документами по технике безопасности при проведении работ в лаборатории <17>.

--------------------------------

<16> ГОСТ 33044-2014 "Принципы надлежащей лабораторной практики", введенный приказом Росстандарта от 20.11.2014 N 1700-ст.

<17> Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда", утвержденное руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005 (далее - Р 2.2.2006-05).

Во время работы в лаборатории следует соблюдать правила техники безопасности. Каждый работающий должен быть информирован о требованиях техники безопасности, принятых в лаборатории, и о местонахождении средств противопожарной безопасности, аптечки для оказания работникам первой помощи. Для ознакомления с правилами безопасного проведения работ организуется регулярный инструктаж сотрудников. Результаты инструктажа заносятся в специальный журнал.

2.9.4. Условия выполнения измерений:

- технически исправное оборудование, включенное в Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений <18>;

--------------------------------

<18> Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений (утвержденные типы средств измерений) - fgis.gost.ru/fundmetrology/registry/4 (в свободном доступе).

- достаточная квалификация персонала (см. п. 2.8.2);

- соблюдение правил при подготовке исследуемых образцов;

- правильный выбор наборов реагентов/тест-систем, соблюдение условий их доставки и хранения;

- соблюдение правил при подготовке и постановке ИФА и ИХА;

- правильный учет и интерпретация результатов;

- внешний и внутрилабораторный контроль качества;

- постановку иммуноферментного анализа следует проводить при температуре плюс 18 - 25 °C;

- не использовать компоненты с истекшим сроком годности;

- при работе нельзя использовать компоненты из разных наборов реагентов/тест-систем и разных серий;

- перед использованием выдержать все компоненты набора при температуре плюс 18 - 25 °C не менее 30 минут;

- нельзя проводить анализ в присутствии реактивных паров (кислот, щелочей, альдегидов) или пыли, которые могут повлиять на ферментативную активность конъюгата;

- не использовать для дезинфекции исследуемых материалов и посуды средства, содержащие активный кислород и хлор, т.к. это приводит к искажению результатов;

- не допускается загрязнения компонентов набора, необходимо использовать чистую посуду, чистые одноразовые наконечники для каждого компонента и исследуемого образца, предпочтительно применение материалов одноразового использования;

- ферментативная реакция чувствительна к присутствию ионов металлов, не допускать контакта металлических предметов с конъюгатом и раствором тетраметилбензидина (далее - ТМБ);

- не использовать одну и ту же емкость для разных растворов;

- необходимо использовать воду дистиллированную по ГОСТ Р 58144-2018;

- не подвергать реагенты воздействию высокой температуры и прямых солнечных лучей;

- если при внесении образца допущена ошибка, повторное внесение образца после аспирации недопустимо;

- при промывке посуды необходимо соблюдать рекомендованное количество циклов промывки, неправильно проведенный этап промывки может привести к неточным результатам.

III. Определение специфических IgE и IgG

Определение специфических IgE

3.1. Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА.

3.1.1. Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА основан на применении антител (далее - АТ) и АГ фиксированных на нерастворимых носителях.

3.1.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).

3.1.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.1.4. Оборудование, расходные материалы и реактивы, необходимые при работе.

3.1.4.1. Для ручной постановки:

1) оборудование <19>:

--------------------------------

<19> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- фотометр вертикального сканирования, позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);

- пипетки полуавтоматические одноканальные и многоканальные варьирующие со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 10 - 1000 мкл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (ошибка +/- 3%);

- цилиндр мерный вместимостью 500 мл, исполнения 2, 1 класса точности, ГОСТ 1770-74;

- стакан мерный вместимостью 25 мл, исполнения 2, 1 или 2 класса точности, ГОСТ 1770-74;

- прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер);

- термостат, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C;

- холодильник бытовой.

2) расходные материалы <20>:

--------------------------------

<20> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- дезинфицирующие средства;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей;

- перчатки резиновые.

3) Набор реагентов, совместимых с методикой <21>:

--------------------------------

<21> Примечание: допускается использование реагентов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- полистироловый 96-луночный наборный планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgE-AT (референс-стрип); стрипы, покрытые аллергенами;

- калибровочные пробы для определения IgE: калибровочная проба 0, содержащая 0 мкг/мл; калибровочная проба D, содержащая 0,5 мкг/мл; калибровочная проба C, содержащая 1 мкг/мл; калибровочная проба B, содержащая 2 мкг/мл; калибровочная проба A, содержащая 5 мкг/мл;

- коньюгат моноклональных антител (далее - МКАТ) анти-IgE, 100-кратный концентрат;

- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;

- ТМБ;

- стоп-реагент;

- трафарет для анализа;

- инструкция по применению;

- паспорт.

3.1.4.2. Для автоматической постановки:

1) Оборудование <22>:

--------------------------------

<22> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- автоматический ИФА-анализатор открытого типа, с возможностью регистрации оптической плотности при длине волны 450 нм (основной) и 620 нм (референсной);

- холодильник бытовой;

- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;

- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74.

2) расходные материалы <23>:

--------------------------------

<23> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей;

- дезинфицирующие средства.

3) Набор реагентов, совместимых с методикой <24>:

--------------------------------

<24> Примечание: допускается использование реагентов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Состав набора на примере набора реагентов от производителя ГК "АлкорБио" (состав набор может меняться в зависимости от производителя):

- полистироловый 96-луночный наборный пластиковый планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgE-AT (референс-стрип), стрипы, покрытые аллергенами;

- калибровочные пробы для определения IgE: калибровочная проба 0, содержащая 0 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 0,5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 1 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 25 МЕг/мл; калибровочная проба, содержащая 100 МЕг/мл;

- контрольная сыворотка с известным содержанием IgE;

- коньюгат МКАТ анти-IgE, 100-кратный концентрат;

- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;

- ТМБ;

- стоп-реагент;

- трафарет для анализа;

- инструкция по применению;

- паспорт.

3.1.5. Проведение методики:

3.1.5.1. Сорбция АГ. В каждую лунку 96-луночного планшета внести 0,1 - 0,5 мкг АГ и 100 мкл 0,05 М карбонат-бикарбонатного буферного раствора (pH 9,6), произвести сорбцию при температуре плюс 4 °C в течение 16 часов. Произвести инкубацию при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмыть (двукратно) не связавшиеся молекулы АГ фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 0,1% твин-20 (по 300 мкл на лунку).

3.1.5.2. Блокировка. Лунки планшета заполнить фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 1% раствор бычьего сывороточного альбумина или других белков (например, казеина, желатина, сухого молока), и инкубировать 10 - 15 минут при температуре плюс 18 - 25 °C.

3.1.5.3. Титрование специфических АТ. АТ титруют в серийных разведениях параллельно со стандартным образцом (СО). В первую лунку ряда внести готовое разведение АТ - в среднем 1 - 10 мкг на лунку, произвести последовательное разведение АТ в лунках. Инкубировать со специфическими АТ, конъюгированные с ферментной меткой, 30 минут при комнатной температуре при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмыть 3 - 4 раза с помощью фосфатно-солевого буферного раствора pH 9,0, содержащего 0,1% твин-20.

3.1.5.4. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта. В лунки внести по 100 мкл раствора субстрата и инкубировать 10 минут при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Для остановки ферментативной реакции применять "стоп реагент", добавлять во все исследуемые и контрольные пробы в равных количествах. Методом колориметрии определить концентрацию окрашенного продукта, используя инструкцию от производителя набора реагентов/тест-систем произвести интерпретацию полученных результатов.

3.1.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.1) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.1

Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови

3.2. Иммунохроматографический метод.

3.2.1. Качественное экспресс определение методом ИХА.

3.2.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.

3.2.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.2.4. Оборудование и материалы <25>:

--------------------------------

<25> Примечание: допускается использование оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- центрифуга 1500 об/мин;

- набор тест-систем, совместимых с методикой.

3.2.5. Методика (см. прилагаемую инструкцию к набору теста):

- смешение исследуемой сыворотки венозной крови с буфером;

- добавление пробы на зону для образца;

- ожидание в течение 5 - 15 минут, пока фронт жидкости пройдет по мембране и появятся цветные тестовая и контрольная линии;

- визуальная оценка результата с использованием инструкции от производителя набора тест-систем.

3.2.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 3, 4 к настоящим МР):

1 - тестовая линия (T) и контрольная линия (C) окрашены - результат теста положительный;

2 - тестовая линия (T) не окрашена, но контрольная линия (C) окрашена - результат теста отрицательный;

3 - тестовая линия (T) и контрольная линия (C) не окрашены - результат теста недействительный;

4 - тестовая линия (T) окрашена, но контрольная линия (C) не окрашена - результат теста недействительный.

3.3. Метод иммуноблоттинга.

3.3.1. Иммуноблоттинг (иммуноблот) - метод выявления антител к отдельным антигенам, основанный на постановке иммуноферментного анализа на нитроцеллюлозных мембранах.

3.3.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.

3.3.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 3 к настоящим МР.

3.3.4. оборудование и материалы, необходимые при работе.

3.3.4.1. Для ручной постановки:

1) Оборудование <26>:

--------------------------------

<26> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- орбитальное качающее устройство или качающее устройство (например, КУ-400);

- аспиратор вакуумный;

- пинцет пластмассовый;

- пипетки автоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3%);

2) расходные материалы <27>:

--------------------------------

<27> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- цилиндры мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;

- стаканы мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей;

- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;

- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;

- одноразовая посуда для приготовления рабочих растворов конъюгата и хромогена;

3) Набор реагентов, совместимых с методикой <28>:

--------------------------------

<28> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками. Состав набора может меняться в зависимости от производителя.

Состав набора на примере набора реагентов от производителя:

- тестовые стрипы, покрытые антигенами IgE;

- контрольная сыворотка с известным содержанием IgE;

- ферментный конъюгат;

- универсальный буфер;

- раствор субстрата: нитросиний тетразолий хлорид/5-бром-4-хлор-3-индолил-фосфат (NBT/BCIP), готов к использованию;

- лоток для инкубации;

- инструкция по применению набора;

- паспорт набора.

3.3.4.2. Для автоматической постановки:

1) оборудование <29>:

--------------------------------

<29> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- прибор для автоматизации иммуноблота;

- холодильник бытовой;

- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;

2) расходные материалы <30>:

--------------------------------

<30> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- перчатки резиновые;

- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- дезинфицирующие средства.

3) Набор реагентов, совместимых с методикой <31>:

--------------------------------

<31> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Состав набора (см. п. 3.3.4.1).

3.3.5. Методика:

- подготовка нитроцеллюлозной мембраны с аллергенами;

- внесение сыворотки больного (специфические АТ связываются с соответствующими АГ);

- добавление АТ против иммуноглобулинов человека, меченных ферментом;

- добавление субстрата и учет реакции.

3.3.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.2) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.2

Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови

3.4. Иммунофлюоресцентный анализ (технология ImmunoCAP).

3.4.1. Иммунофлюоресцентный анализ ImmunoCAP - метод выявления специфических АГ к широкому спектру аллергокомпонентов (112 единиц) из 51-го источника аллергенов с помощью IgE конъюгированных с флюорохромом.

3.4.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).

3.4.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.4.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.

1) оборудование <32>:

--------------------------------

<32> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- автоматизированный проточный цитометр со стандартными источниками синего (488 нм) и красного (638 нм) лазера;

2) расходные материалы <33>:

--------------------------------

<33> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- дезинфицирующие средства;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей;

3) Набор реагентов <34>.

--------------------------------

<34> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

Состав набора in vitro:

- ImmunoCAP ISAC 112i Chip, чип;

- ImmunoCAP ISAC E Detection Antibody, конъюгат;

- ImmunoCAP ISAC E Control, калибратор;

- инструкция по применению.

3.4.5. Методика:

- сбалансированная смесь специфических ингаляционных аллергенов (Phadiatop), либо индивидуальный специфический аллерген (в зависимости от выбранной методики), ковалентно связанные с ImmunoCAP, реагируют со специфическими IgE в образце сыворотки пациента. Комплекс "АГ-АТ" связываются меченные ферментом АТ против IgE;

- инкубация с проявляющим реагентом и измерение уровня флюоресценции элюата по калибровочной кривой.

3.4.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.3) оценивается с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.3

Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови

3.5. Твердофазный ИФА (технология Alex).

3.5.1. Технология Alex - метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА, количественное определение соединений комплекса "антиген-антитело".

3.5.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).

3.5.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.5.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.

3.5.4.1. Для ручной постановки см. п. 3.1.4.1 и набор реагентов Allergy Explorer2/50.

Состав набора Allergy Explorer2/50:

- аллергочип Alex2 (англ. Alex2 Cartridge);

- промывающий раствор Alex2 (англ. Alex2 Washing Solution);

- разбавитель образца Alex2 (англ. Alex2 Sample Diluent);

- детектирующие антитела Alex2 (англ. Alex2 Detection Antibody);

- субстратный раствор Alex2 (англ. Alex2 Substrate Solution);

- стоп-реагент Alex2 (англ. Alex2 Stop Solution);

- инструкция по эксплуатации в комплекте поставки.

3.5.4.2. Для автоматической постановки см. 3.1.4.2 и набор реагентов Allergy Explorer2/50.

3.5.5. Методика:

- сбалансированная смесь специфических ингаляционных аллергенов (Phadiatop), либо индивидуальный специфический аллерген (в зависимости от выбранной методики), ковалентно связанные с ImmunoCAP, реагируют со специфическими IgE в образце сыворотки пациента;

- комплекс "АГ-АТ" связываются меченным ферментом АТ против IgE;

- инкубация с проявляющим реагентом и измерение уровня флюоресценции элюата по калибровочной кривой.

3.5.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.4) определяется с учетом методики в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.4

Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови

3.6. Метод иммуноблоттинга и ИФА (технология Protia Allergy-Q).

3.6.1. Технология Protia Allergy-Q сочетает в себе метод ИФА и иммуноблоттинг (иммуноблот) - выявления антител к отдельным антигенам, основанная на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах.

3.6.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.

3.6.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.6.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.

3.6.4.1. Для ручной постановки:

1) оборудование <35>:

--------------------------------

<35> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- орбитальное качающее устройство или качающее устройство (например, КУ-400);

- анализатор иммунологический фотометрический "Q-SMART" для диагностики in vitro на панелях PROTIA Allergy-Q, позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);

- аспиратор вакуумный;

- пипетки автоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3%);

- цилиндры мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;

- стаканы мерные вместимостью 10 мл и 200 мл.

2) расходные материалы <36>:

--------------------------------

<36> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- пинцет пластмассовый;

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей;

- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;

- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;

- одноразовая посуда для приготовления рабочих растворов конъюгата и хромогена.

3) Набор реагентов Protia Allergy-Q <37>.

--------------------------------

<37> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

Состав набора Protia Allergy-Q:

- панель для аллергенов;

- разбавитель образца;

- раствор антител;

- ферментный раствор;

- раствор субстрата;

- моющий раствор;

- инструкция по применению.

3.6.4.2. Для автоматической постановки:

1) оборудование <38>:

--------------------------------

<38> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- прибор для автоматизации иммуноблота;

- анализатор автоматический иммунологический фотометрический "Q-Station Elite" для диагностики in vitro на панелях "Protia", позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);

- аспиратор вакуумный;

- холодильник бытовой;

- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;

- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74.

2) расходные материалы <39>:

--------------------------------

<39> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- дезинфицирующие средства.

3) Набор реагентов Protia Allergy-Q <40>.

--------------------------------

<40> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

Состав набора Protia Allergy-Q см. в п. 3.6.4.1.

3.6.5. Методика:

- метод ИФА, включающий себя одну нитроцеллюлозную мембрану;

- подготовка нитроцеллюлозной мембраны с аллергенами;

- внесение сыворотки больного (специфические АТ связываются с соответствующими АГ);

- добавление АТ против иммуноглобулинов человека, меченных ферментом;

- добавление субстрата и учет реакции.

3.6.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.5) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.5

Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови

Определение специфических IgG (IgG 1, 4)

3.7. Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА - метод, основанный на применении АГ и АТ, фиксированных на нерастворимых носителях.

3.7.1. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).

3.7.2. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.7.3. Оборудование и материалы, необходимые при работе.

3.7.3.1. Для ручной постановки (см. п. 3.1.4.1).

Состав набора реагентов <41>:

--------------------------------

<41> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

- полистироловый 96-луночный наборный планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgG-AT (референс-стрип); стрипы с адсорбированными аллергенами;

- полистироловый 96-луночный наборный планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgG4-AT (референс-стрип); стрипы с адсорбированными аллергенами;

- калибровочные пробы для определения IgG: калибровочная проба 0, содержащая 0 мкг/мл; калибровочная проба D, содержащая 0,5 мкг/мл; калибровочная проба C, содержащая 1 мкг/мл; калибровочная проба B, содержащая 2 мкг/мл; калибровочная проба A, содержащая 5 мкг/мл;

- калибровочные пробы для определения IgG 1, 4: калибровочная проба 0, содержащая 0 нг/мл; калибровочная проба D, содержащая 15 нг/мл; калибровочная проба C, содержащая 50 нг/мл; калибровочная проба B содержащая 150 нг/мл; калибровочная проба A, содержащая 500 нг/мл;

- коньюгат МКАТ анти-IgG, 100-кратный концентрат;

- коньюгат МКАТ анти-IgG1, 100-кратный концентрат;

- коньюгат МКАТ анти-IgG4, 100-кратный концентрат;

- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;

- ТМБ;

- стоп-реагент;

- трафарет для анализа;

- инструкция по применению;

- паспорт.

3.7.3.2. Для автоматической постановки (см. п. 3.1.4.2).

Состав набора реагентов <42>:

--------------------------------

<42> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

- полистироловый 96-луночный пластиковый планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgG-AT (референс-стрип); стрипы с адсорбированными аллергенами;

- калибровочные пробы для определения IgG1: калибровочная проба 0, содержащая 0 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 0,5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 1 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 25 МЕг/мл; калибровочная проба, содержащая 100 МЕг/мл;

- калибровочные пробы для определения IgG4: калибровочная проба 0, содержащая 0 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 0,5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 1 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 25 МЕг/мл; калибровочная проба, содержащая 100 МЕг/мл;

- контрольная сыворотка с известным содержанием IgG 1, 4;

- коньюгат МКАТ анти-IgG 1, 4, 100-кратный концентрат;

- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;

- ТМБ;

- стоп-реагент;

- трафарет для анализа;

- инструкция по применению;

- паспорт.

3.7.4. Методика.

Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА (см. п. 3.1.5).

3.7.5. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgG (табл. 3.6) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.6

Интерпретация результатов содержания IgG в сыворотке крови

3.8. BAT.

3.8.1. Принцип метода: BAT основан на экспрессии рецепторов к IgG на поверхности базофилов, что при взаимодействии IgG с аллергеном приводит к высвобождению вазоактивных медиаторов и появлению новых молекул.

3.8.2. Биоматериал: гепаринизированные образцы цельной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).

3.8.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.8.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.

3.8.4.1. Для автоматической постановки:

1) оборудование <43>:

--------------------------------

<43> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- автоматизированный проточный цитометр со стандартными источниками синего (488 нм) и красного (638 нм) лазера;

2) расходные материалы <44>:

--------------------------------

<44> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- дезинфицирующие средства.

3) Набор реагентов, совместимых с методикой <45>.

--------------------------------

<45> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками. Состав набора может меняться в зависимости от производителя.

Состав набора реагентов:

- коктейль антител CRTH2-FITC/CD203c-PE/CD3-PC7;

- положительный контроль IgE-опосредованной активации базофилов;

- раствор для активации базофилов in vitro;

- раствор для остановки реакции активации;

- лизирующий раствор;

- фиксирующий раствор.

3.8.5. Методика:

- добавить 20 мкл PBS (фосфатно-солевой буфер) в пробирку "Neg" (отрицательный контроль); 20 мкл лизирующего раствора положительный контроль в пробирку "Pos" (положительный контроль); 20 мкл анализируемого аллергена в пробирку "Test" (различные разведения аллергена);

- добавить в каждую пробирку по 20 мкл реагента CRTH2-FITC/CD203c-PE/CD3-PC7;

- добавить в каждую пробирку по 100 мкл цельной крови;

- перемешать содержимое каждой пробирки на вортексе и инкубировать на водяной бане в течение 15 минут при температуре плюс 37 °C в защищенном от света месте;

- добавить в каждую пробирку по 100 мкл раствора для остановки реакции и перемешать на вортексе в течение 5 секунд;

- добавить в каждую пробирку по 2 мл раствора для лизирования с одновременной фиксацией и перемешать;

- инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре (плюс 18 - 25 °C) в защищенном от света месте.

- отцентрифугировать пробирки в течение 5 минут при 200 об/мин и удалить супернатант аспирацией;

- добавить в каждую пробирку по 3 мл PBS;

- отцентрифугировать пробирки в течение 5 минут при 200 об/мин и удалить супернатант аспирацией;

- ресуспендировать осадок клеток в 0,5 мл 0,1% раствора формальдегида в PBS;

- проанализировать пробы на проточном цитофлуориметре.

3.8.6. Интерпретация результатов оценки уровня содержания специфических IgG (табл. 3.7) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5).

Таблица 3.7

Интерпретация результатов содержания специфических IgG

3.9. Тест трансформации лимфоцитов.

3.9.1. Принцип метода: выявление аллергической клеточно-опосредованной сенсибилизации (аллергия IV типа) на определенный компонент.

3.9.2. Биоматериал: цельная кровь с литий-гепарином. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).

3.9.3. Оборудование, материалы и реагенты, необходимые при работе.

1) оборудование <46>:

--------------------------------

<46> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- бинокулярный световой микроскоп с увеличением 40x/0,65; 100x/1 (например, Микмед-5);

- термостат, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C;

- холодильник бытовой;

- стакан мерный вместимостью 25 мл, исполнения 2, 1 или 2 класса точности, ГОСТ 1770-74;

- пробирки стерильные вместимостью 5 мл, исполнения 2, 1 или 2 класса точности, ГОСТ 1770-74.

2) расходные материалы <47>:

--------------------------------

<47> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- предметные и покровные стекла;

- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;

- дезинфицирующие средства;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей.

3) Реагенты <48>:

--------------------------------

<48> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками. Состав набора может меняться в зависимости от производителя.

- набор красок для окрашивания по Романовскому-Гимзе <49>;

--------------------------------

<49> Приказ Минздрава России от 29.04.2025 N 258н.

- масло иммерсионное;

3.9.4. Методика:

- отстоять кровь до получения четкого разделения эритроцитов и плазмы;

- полученную плазму поместить в стерильные флаконы со средой 199 и антибиотиками;

- в контрольные образцы добавить изотонический раствор, а в опытные - исследуемый антиген или митоген;

- инкубировать при температуре плюс 37 °C в течение 24 - 72 часов (для митогенов);

- для оценки пролиферации клеток в ответ на антиген время культивирования может быть увеличено до 6 - 7 суток;

- надосадочную жидкость ресуспендировать в среде 199, центрифугировать 15 - 20 минут 1500 об/мин, удалить надосадочную жидкость, добавить уксусную кислоту, повторно центрифугировать;

- осадок перенести на предметное стекло и окрасить по Романовскому-Гимзе;

- микроскопировать в иммерсионной системе, провести учет результатов.

Примечание: подсчитывают число малых лимфоцитов (диаметр клеток 7 - 7,5 мкм), бластоподобных переходных форм (8 - 14 мкм) и бластов (более 14 мкм); для корректной оценки процента бластной трансформации необходим подсчет 200 - 300 клеток. Провести учет спонтанной и стимулированной бластной трансформации.

3.9.5. Интерпретация: показатели в пределах нормы - уровень спонтанной реакции бластной трансформации лимфоцитов до 10%, стимулированной митогеном - 40 - 70%.

3.10. Определение HLA не является в полной мере методом выявления сенсибилизации, но в отсутствии других лабораторных тестов, также может стать доказательством лекарственной сенсибилизации.

--------------------------------

<50> Приложение 5 Р 2.2.2006-05.

Таблица П5.1

Высокоопасные аллергены

Таблица П5.2

Умеренно опасные промышленные аллергены

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Федеральный закон от 26.07.2008 N 102 "Об обеспечении единства измерений".

3. СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней".

4. СП 2.1.3678-20 "Санитарно-эпидемиологические требования к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг".

5. Приказ Минтруда России N 988н, Минздрава России N 1420н от 31.12.2020 "Об утверждении перечня вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся обязательные предварительные медицинские осмотры при поступлении на работу и периодические медицинские осмотры".

6. Приказ Минздравсоцразвития России от 23.07.2010 N 541н "Об утверждении единого квалификационного справочника должностей руководителей, специалистов и служащих, раздел "Квалификационные характеристики должностей работников в сфере здравоохранения".

7. Приказ Минздрава России от 29.04.2025 N 258н "Об утверждении порядка проведения экспертизы связи заболевания с профессией, учетной формы извещения об установлении диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, уточнении или отмене диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, учетной формы медицинского заключения о наличии или об отсутствии профессионального заболевания, порядка учета профессионального заболевания органом государственного санитарно-эпидемиологического контроля (надзора), проводившим расследование обстоятельств и причин возникновения у работника профессионального заболевания, формы протокола заседания комиссии по расследованию случая профессионального заболевания".

8. Приказ Минздравмедпрома России от 16.08.1994 N 170 "О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ-инфекции в Российской Федерации".

9. Приказ Минздрава СССР от 12.07.1989 N 408 "О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране".

10. Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда".

11. ГОСТ 1770-74 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

12. ГОСТ Р 58144-2018 "Вода дистиллированная. Технические условия".

13. ГОСТ 12026-76 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".

14. ГОСТ Р 53079.4-2008 "Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа".

15. ГОСТ 33044-2014 "Принципы надлежащей лабораторной практики".

Методические рекомендации разработаны ФБУН "Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека" (Э.Р. Шайхлисламова, Е.Р. Абдрахманова, Л.М. Масягутова, А.Р. Музафарова, А.И. Борисова, Л.А. Рафикова, Р.А. Даукаев); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Башкортостан" (И.И. Хисамиев); ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России (Э.А. Имельбаева).