Приложение 12. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ И ПОСТОРОННИХ ДРОЖЖЕЙ
Сусло-агар. К солодовому суслу концентрацией 8% СВ добавляют 2% агара и нагревают до кипения. Среду разливают в пробирки по 10 мл и стерилизуют при избыточном давлении 50 кПа в течение 20 мин.
Дрожжевой агар. К дрожжевой воде добавляют 4% сахарозы и 2% агара. После расплавления агара среду разливают в пробирки по 10 мл и стерилизуют при 50 кПа в течение 20 мин. Дрожжевая вода: на 1 л водопроводной воды берут 80 г прессованных дрожжей, кипятят в течение 20 мин., фильтруют в горячем виде, стерилизуют при 100 кПа в течение 60 мин.
Молочный агар. Обезжиренное молоко разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при давлении 50 кПа в течение 20 мин. Отдельно готовят водный агар (водопроводная вода + 3% агара), разливают в пробирки по 5 мл, стерилизуют при 100 кПа в течение 30 мин. Перед использованием водный агар расплавляют, соединяют с молоком, и смесь вливают в чашку Петри.
Среда для выявления бактерий кишечной группы (непатогенных). На 1 л водопроводной воды добавляют следующие ингредиенты: пептон - 10 г, NaCl - 5 г, лактоза - 10 г, сахароза - 10 г, глюкоза - 1 г. Среду фильтруют, устанавливают pH, равный 7,2 - 7,4. Затем на 1 л среды добавляют раствор одного из следующих индикаторов-красителей: а) феноловый красный - 2 мл 0,4-процентного водного раствора; б) бромтимоловый синий - 2 мл 0,5-процентного спиртового раствора; в) розоловая кислота + метиленовая синь в количестве 1 мл 5-процентного спиртового раствора и 2,3 мл 1-процентного водного раствора соответственно.
С феноловым красным среда имеет малиновый цвет, с бромтимоловым синим - синий, с розоловой кислотой + метиленовой синью - вишневый.
К среде с индикатором добавляют 1,5% агара и стерилизуют не более 15 мин. при 50 кПа. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С.
Бактерии группы кишечной палочки резко изменяют pH в том участке среды, где вырастает колония этих бактерий, поэтому среда вокруг колонии меняет свой цвет: с феноловым красным цвет сначала становится оранжевым, затем желтым; с бромтимоловым синим - сначала травянисто-зеленым, затем желтым; с розоловой кислотой и метиленовой синью - сначала желто-розовый, затем желтый. Колонии других вырастающих микроорганизмов не меняют цвета среды.
Синтетическая среда с лизином. В 1 л водопроводной воды
растворяют 50 г глюкозы, 3 г лизина, 1 г KH PO , 1 г MgSO ,
2 3 4
FeSO - следы. Каждый компонент растворяют в воде отдельно и
4
добавляют в указанном порядке. Далее вносят 2% агара, расплавляют,
разливают в пробирки и стерилизуют при 50 кПа в течение 20 мин.